水产养殖用过硫酸氢钾消毒效果好在哪?
过硫酸氢钾对五种水产动物病原菌的敏感性研究 鱼类繁殖与健康养殖中心 西南大学(荣昌校区),重庆 402460 不同浓度条件下,试验了过硫酸氢钾对5种水产动物常见病原菌,包括柱状曲挠杆菌、荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的药物敏感性。结果表明:过硫酸氢钾对这几种病原菌的MIC为3.1~5.7mg /L之间,MBC为4.5~8.3 mg /L之间。 关键词:过硫酸氢钾 病原菌 药物敏感性 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种 试验菌株选择水产养殖鱼类的常见致病菌,试验菌株取自农业部渔业动植物病原库。
1.1.2 试验药品 试验药品"过硫酸氢钾"本试验所使用的过硫酸氢钾由连云港永荣生物科技有限公司提供,具体产品信息见表1。 表1 过硫酸氢钾产品信息
1.1.3 培养基 选用肉汁胨培养基:蛋白胨10g,牛肉膏5g,NaCl 5g,H2O 1000mL,pH 7.2~7.4,1.05 kp灭菌20min。 1.2 方法 1.2.1 菌悬液的制备 将各菌株接种到已灭菌的培养基上,培养24-48h后刮取菌苔,置于无菌生理盐水中摇匀,离心2次(4500r/min,每次20min),收集沉淀,重悬于无菌生理盐水中,参照麦氏比浊管将菌液稀释到约107 CFU/mL。 1.2.2 药液配制 过硫酸氢钾用无菌水稀释1000mg/L备用。 1.2.3 抗菌效果试验 1.2.3.1 药物敏感性试验 药敏试验采用滤纸片法,根据抑菌圈的大小,来判断菌种对药物的敏感性,是敏感,中度敏感还是耐药。干燥纸片的制备方法:选用吸水力强而且质地均匀的滤纸,用打洞机制成6mm直径的圆纸片,120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的药液,每100张纸片加入1.0mL药液,使它均匀浸润,放在无菌平皿中,37℃使它干燥,分装小瓶中并封口,4℃保存。采用平板扩散法将培养的试验菌株以无菌水制成约106 CFU/mL的菌悬液,移取100 μL菌悬液至肉汁胨固体培养基上,推样器推匀,稍干后镊取无菌圆纸片贴放于接种过试验菌株的平皿培养基表面,使每片含100μg的药物,28℃恒温培养24h后,游标卡尺测量抑菌圈直径(郑钧镛等,1989),见表2。 1.2.3.2 最小抑菌浓度(MIC)测定试验 使用试管稀释法。吸取预先配制好的药物母液1mL,加入灭菌试管中,加无菌水至9mL,每一试管再移取菌悬液1mL(预先培养18h,浓度约为107cfu/mL),混匀,28℃恒温培养,24h后每管移取1mL至9mL无菌肉汁胨液体培养基内培养,肉眼观察,含最小量尚呈明显不混浊的试管所含药物的浓度为最小抑菌浓度(MIC) ,见表3,4。 1.2.3.3 最小杀菌浓度(MBC)测定试验 按液体培养基稀释法的操作方法测了药物的MIC,然后把未长出菌的各个试管培养液分别移种到无菌平板上,培养后凡是平板上无菌生长的药物最低浓度就是最小杀菌浓度(MBC),见表4。 2 结果 2.1 过硫酸氢钾对不同病原菌的敏感性 表1 不同细菌对过硫酸氢钾的敏感性 注:S-敏感;R-不敏感。 2.2对几株细菌的最小抑菌浓度(MIC)试验 过硫酸氢钾对5株细菌的抑菌试验结果。“+/-”表示,2个平行组中1个为“+”、1个为“-”;“+”或“-”表示,2个平行组的结果相同,同为“+”或“-”, “+”表示有细菌生长,而“-”表示无细菌生长。每种病原菌的每个浓度梯度均设1个不加药物的阴性对照,以便于区别浑浊是由细菌繁殖造成还是药物本身产生的浑浊,抑或细菌由于其它原因造成了死亡(表2)。 表2 过硫酸氢钾对几株细菌的杀灭效果 (mg / L)
过硫酸氢钾对柱状曲挠杆菌等的MIC值见表3。 表3 过硫酸氢钾对几株细菌的最小抑菌浓度(MIC)(mg / L)
2.3对几株细菌的最小抑菌浓度(MBC)试验 过硫酸氢钾对柱状曲挠杆菌等的MBC值见表4。 表4 过硫酸氢钾对几株细菌的最小杀菌浓度(MBC) (mg / L)
3 结论 过硫酸氢钾对水产动物常见病原菌有较强的抗菌力,过硫酸氢钾对试验的5种病原菌的MIC为3.1~5.7mg/L之间,MBC为4.5~8.3 mg/L之间。
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