北京地区匙吻鲟剖腹取卵技术
匙吻鲟隶属于鲟形目，匙吻鲟科，是原产于北美洲的一种大型淡水经济鱼类。该品种具有适温范围广、生长速度快、易饲养、易捕捞等特点，目前在湖北、广东、北京等地多有养殖。在匙吻鲟的人工繁殖方面，我国虽于2001年首次取得了突破，但至目前为止大多采用的是传统人工挤卵的方法，该方法耗时长、对亲鱼损伤大且很难将成熟卵彻底挤出，存在诸多弊端。鉴于此，北京市鲟鱼、鲑鳟鱼创新团队的养殖与繁育岗位专家在通州区永乐店镇小务基地开展了北京地区匙吻鲟剖腹取卵技术的初步试验研究，以期能够在繁殖技术上有所突破，为降低亲本损耗、提高亲本产卵率、向市场提供数量充足且优质的匙吻鲟苗种打下基础。
一、试验材料
1.亲鱼来源
匙吻鲟亲鱼为2014年4月从湖北省仙桃市引进，在通州区永乐店镇小务基地进行培育。雌鱼平均规格为11.95kg/尾，雄鱼平均规格为8.3kg/尾，雌雄比例1∶1。每尾亲鱼胸鳍基部都嵌入有生物芯片，通过芯片可以追溯该尾亲鱼的体重、性别、生长与繁育情况等全部相关信息。
2.鱼暂养池准备
亲鱼暂养池为繁殖车间内两个规格相同的圆形水泥池，雌雄亲鱼需分开暂养。暂养池直径4m，池深1.5m，水深1.2m，使用前用20ppm的高锰酸钾彻底消毒，暂养池用水在人工繁殖操作前3天，用地下井水与亲鱼原池水按1∶1比例调配好备用，池内开启增氧设备。
3.孵化设备的准备
孵化设备为2套俄罗斯尤先科自动翻卵式孵化器,每个孵化器每次可孵化10万粒～15万粒受精卵。孵化前进行消毒处理,并调好水流进行试运转。
4.繁殖用具的准备
繁殖用具包括：干净塑料盆10个、鹅毛、生理盐水、医用滑石粉、塑料大桶（脱粘用）、毛巾、催产药物（LHRH-A2与DOM）、注射器（20mL、10mL、5mL）、鱼夹、筛绢、烧杯（50mL、200mL、1000mL）、小方型捞海、产钳、外科用手术刀、外科用剪刀、弧形针、医用缝合线、解剖镜、载玻片等。
二、试验方法
1.亲鱼的雌雄鉴别与挑选
在繁殖季节，匙吻鲟雌性亲鱼个体较大、腹部膨胀且有弹性、生殖孔周边肿胀、充血，头部周边没有“朱星”；而雄性亲鱼个体相对较小、腹部狭长、头部周边有较多“朱星”，且发育较好的雄性个体，轻压其腹部或生殖孔周边，有少量精液流出。此外挑选雌性亲鱼时如果鱼体腹部虽大但过于柔软、无弹性则有发育过熟的可能，不可作为亲本使用，应选取腹部膨大，生殖孔红肿，且腹部仍有弹性的雌性亲鱼进行催产。本次试验挑选2组（雌雄比1∶1）体质健康且发育较好的亲鱼进行催产，在催产前2天将挑选好的亲鱼移至暂养池中暂养，具体催产亲鱼重量如表1所示。
表1 催产亲鱼体重表
2.人工催产
2015年4月20日，水温持续稳定在16℃以上，开始进行人工催产，催产操作完毕后，将亲本放回暂养池，可适当用流水刺激。
采取二次注射法，背鳍基部肌肉注射，注射药物为LHRH-A2与DOM两种，具体如表2所示。
表2 匙吻鲟人工催产情况表
3.人工授精
第二针注射以后，亲鱼需要专人值守。接近效应时间时，每隔半小时至一个小时用捞海检查暂养池底部是否有卵粒出现，越接近效应时间，检查频率越高。如发现有卵粒出现，应立即开始人工授精操作。
（1）取精液取卵之前，先将雄鱼精液取出备用。方法：用鱼夹将雄鱼抬出暂养池，头上尾下用干净毛巾将鱼体快速擦干，轻轻挤压雄鱼腹部或生殖孔两侧，将精液挤出，盛入烧杯内，盖上遮光盖，放入冰盒中备用。
（2）剖腹取卵
将雌鱼捞出暂养池，放在预先配制好的麻醉液中浸泡1分钟～2分钟，待亲鱼完全麻醉后，将其腹部朝上放置于手术台上，擦干鱼体，延亲鱼的下腹部中线、生殖孔以上约10cm处切开6cm～7cm 左右的切口，用产钳轻轻的将腹中成熟的卵取出，置于盆中，称重。取卵过程中，动作要轻，且不断向亲鱼的鳃内淋水以保证鳃呼吸，操作同时应及时将多余水分和鱼体出血擦干。取卵后，迅速将剖腹切口用医用缝线缝合，伤口处用医用酒精消毒，鱼体注射青霉素防治伤口发炎，然后放回暂养池。本试验对两尾雌鱼亲本的取卵情况如表3所示。
表3 亲鱼取卵情况表
（3）授精授精过程要求快速、准确、动作轻。精液用生理盐水激活后,迅速将其倒入盛有卵粒的塑料盆中，精液用量为0.2mL/万粒～0.4mL/万粒卵，具体需根据精液质量确定（提前在显微镜下观察精子活力确定）。轻轻晃动塑料盆约半分钟，使精卵充分结合，然后用干净的井水倒入受精卵盆里，冲洗剩余的精液，再慢慢将混合液倒出。从精、卵混合到冲洗完毕需要在1分钟内完成。
（4）脱粘
将调配好的医用滑石粉液体（浓度：20%）倒入受精卵盆中，然后用鹅毛轻轻的顺时针不断搅拌，脱粘45分钟。
（5）洗卵脱粘后将卵倒入事先准备好的铺有筛绢的水盆里，轻轻晃动筛绢，洗掉滑石粉，连洗数次，直至将滑石粉全部洗掉，再将受精卵转入孵化器中进行孵化。
4.亲鱼产后处理
采完精液与卵后，为防止生殖孔与伤口感染，亲鱼需注射浓度为5000IU/kg的青霉素，体表须经消毒处理，再放回暂养池精心饲养，待亲鱼恢复后放回原池。
5.人工孵化
人工孵化的重点是控制合适的水温与水流，保证水体充足的溶解氧和清新的水环境，同时加强孵化期间的管理。孵化的第二天与第三天是水霉病爆发的关键时段，可每日用防治水霉病的中草药浸泡鱼卵，同时及时挑出卵皮以及霉卵、死卵进行防治。孵化后期，将先孵出的仔鱼及时转移到鱼苗培育池中培育。
水温19℃～20℃条件下，匙吻鲟受精卵在孵化器中经3天～4天全部出膜。
三、结果与分析
本次试验两组亲鱼均顺利繁殖，催产率100%；共获卵21万粒，受精卵18.3万粒，受精率87%；孵化率80.3%；亲本成活率100%。试验结果表明，采用剖腹取卵技术，能够保证亲鱼的产卵数量、节省产卵时间，降低亲鱼的损伤率，达到了试验目的。
1.剖腹取卵的优点
匙吻鲟怀卵量大，传统的挤卵方式很难将卵粒全部取出，且耗时长，对亲鱼体力消耗很大。采用剖腹取卵的方法，在保证亲鱼产卵数量，节省产卵时间，降低亲鱼的损伤率等方面有很大的优势，手术后经过2个月左右的精心饲养，伤口大多能愈合，鱼体也能恢复正常。
2.匙吻鲟剖腹取卵技术关键
（1）缝合线的选用
鱼类生活在水环境中，伤口愈合较陆生动物慢，因此缝合线的选用较为重要，一般缝合线要求强度高、免拆除且不影响伤口愈合，通常使用医用羊肠线。
（2）手术取卵刀口的位置与大小
手术取卵刀口的位置与大小是影响术后亲鱼成活率的关键因素之一，手术切口大，有利于取卵，但不利于亲鱼的恢复，切口太小又不能在较短的时间内顺利取卵。笔者通过查阅大量文献，结合现有条件，确定本试验剖腹取卵的刀口开在亲鱼腹部后端，距离生殖孔10cm左右，刀口长度在6cm～7cm。术后两尾亲鱼全部成活，且刀口愈合完好。
（3）亲鱼产后护理
亲鱼的产后护理是人工繁殖过程中非常重要但又容易被忽略的一项内容。在对匙吻鲟亲鱼的剖腹取卵操作完毕后，需对亲鱼注射剂量为5000IU/kg的青霉素，体表经消毒处理后放回提前准备好的暂养池，精心饲养，保持水质清新，溶氧浓度不低于5mg/L。待亲鱼恢复后放回原池。
（4）其他注意事项
此外，在整个人工繁殖过程中，还要注意鱼体、器具要严格消毒；伤口缝合要平衡、牢固；取卵要迅速、动作要轻。
剖腹取卵技术的研究始于上世纪60年代末的前苏联，并在1984年取得了该项技术的成功。目前，活体取卵技术已广泛应用于鲟、鳇鱼的人工繁殖中，但对匙吻鲟剖腹取卵技术的相关研究报道很少，尤其是在北方地区匙吻鲟人工繁殖技术中的应用尚未见报道，过本次试验，使我们初步掌握了匙吻鲟剖腹取卵技术，为今后该技术的进一步熟化与完善奠定了基础。试验结果表明，剖腹取卵技术在匙吻鲟的人工繁殖中的应用是可行的。笔者也希望今后通过对该技术的不断完善，使其广泛应用于匙吻鲟人工繁殖工作中，为市场提供充足、优质、价廉的匙吻鲟苗种打下基础。
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