水产养殖菌落检测(水产品细菌菌落总数的测定)

发布时间：2023-04-21 01:06:03编辑：水产百科归类：鱼类养殖

1. 水产品细菌菌落总数的测定

cfu菌落计数方法公式：每毫升中菌落形成单位(cfu)=同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5。菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。

按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

2. 水产品细菌菌落总数的测定方法

我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌，GB5749-85《中华人民共和国国家标准

生活饮用水卫生标准》规定，生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个。

在某些情况下，水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准

生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。

二、水质微生物检验方法

GB5750-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。

（一）细菌总数的检测：

国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。

对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。

对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。

按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。

（二）总大肠菌群的检测：

国家标准中，利用总大肠菌群作为粪便污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。

国家标准提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群的方法。

多管发酵法检测总大肠菌群，分为三步：初发酵试验，平板分离，复发酵证实试验。初发酵试验，采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况。对阳性管培养物，接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基，观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，并根据标准所附检数表报告结果。

其中，对生活饮用水，初发酵试验接种水样总量300ml，即100ml接种2管，10ml接种10管，采用两个稀释度，12支发酵管。对水源水，初发酵试验接种水样总量55.5ml，即10ml接种5管，1ml接种5管，0.1ml接种10管，共采用三个稀释度，15支发酵管。两种接种方法，所用的检数表是不同的。

滤膜法检测总大肠菌群，就是利用微孔滤膜，过滤一定量水样，将水样中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜帖放在选择性培养基上（如品红亚硫酸钠培养基），经培养和证实试验后，直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落，并计算出每升水样中含有的总大肠菌群数。

3. 水产品菌落总数标准

酱油指标有国家颁布的《酱油卫生标准》，挑选好酱油的技巧如下：

1、酱油里有一种营养物质叫氨基酸态氮，这种物质是大豆发酵过程中产生的，发酵的时间长，这种物质越多，酱油越好。

特级酱油氨基酸态氮含量大于等于0.8g每百毫升；一级酱油大于等于0.7g每百毫升；二级酱油大于等于0.55g每百毫升；三级酱油大于等于0.4g每百毫升。目前我国酱油标准就这四个标准。

2、正规厂家生产的酱油在标签上都会标明该酱油适合佐餐用还是适合烹调用。两者的卫生指标是不同的，所含菌落指数也不同。供佐餐用的可直接入口，卫生指标较高，如果是供烹调用的，则千万不能用于拌凉菜。随着技术的进步，好的酱油烹调或佐餐已通用。

3、优先选择“酿造酱油”，而不是“配制酱油”，前者品质更佳。

4、晃动瓶身，好的酱油会出现细小的气泡，而且消失的慢，并且酱油挂瓶；如果出现大气泡，而且会很快消失，酱油也不太挂瓶，这样的酱油不太好，可能是勾兑的。

5、质量好的酱油，色泽红润，呈红褐色或棕褐色，澄清时不浑，没有沉淀物。用质量好的酱油烹调出的菜肴色泽红润，气味芳香。

4. 水产品细菌总数要求

10倍。的确人体拥有100万亿的细菌,是人体总细胞数的10倍。细菌这种微生物，可以说是无处不在，对人而言既有有益的，也有有害的。

5. 水产品细菌菌落总数的测定实验报告

国家饮用水标准GB 5749-85规定，菌落总数不得超过100 cfu/g(ml)，所用的方法是稀释平板计数法。

6. 水产品中菌落总数和大肠杆菌群的检验

耐热大肠菌群的检测可以通过以下几个步骤实现：1.对样本进行处理：将样本经过预处理之后，得到样本液，常见的预处理方法有过滤、离心、浸泡等。2.制作平板：将适量的琼脂平板放入冷却好的琼脂基质中，将其浸泡在冷却的琼脂中，待琼脂凝固后，将其倒扣，放入温箱内进行灭菌处理。3.接种细菌：将从样本中提取到的耐热大肠菌群细菌在微生物工作台上进行接种和培养，培养后将菌落观察和计数，从而得出菌落数量。4.结果分析：通过对菌落数量的统计和分析，可以得出样品中耐热大肠菌群的含量，并做出检测报告。因此，通过以上步骤，可以对耐热大肠菌群进行检测，并得出准确的结果。

7. 水产品菌落总数测定,培养温度为

01 修改了设备和材料

将设备“恒温水浴箱：46℃±1℃”改成“恒温装置：48℃±2℃”，这样会使检验设备的选择更加广泛，可以使用恒温水浴箱、恒温水浴锅、恒温干燥箱等恒温装置均可。恒温装置温度设定提高2℃，温度范围也增加了，这样更有利于实际操作，减少培养基在注皿时出现凝固现象，有利于样品和培养基的充分混匀。

02 修改了培养基和试剂

增加了菌落总数测试片，同时将菌落总数测试片的质量要求作出了明确规定（应符合GB 4789.28中平板计数琼脂培养基质量控制要求，且主要营养成分与平板计数琼脂培养基配方一致）,这样会使得采用菌落总数测试片检测和采用平板计数琼脂培养基检测的结果保持一致性。增加了菌落总数测试片后，实验室可以根据工作需要，选择相应的培养基。菌落总数测试片会更方便快捷，会大大提高某些样品的检测速度。

03 修改了检验程序

检验程序在培养环节增加了培养温度和时间，使得标准更规范，表述更清晰。

04 修改了操作步骤

增加了液体样品稀释也可以采用拍击式均质器拍打制成样品匀液的方法，液体样品结果要求为每g样品中菌落总数时，需要按6.1.1操作（即固体和半固体样品的样品匀液制备操作），这样实验室操作选择性更强，标准描述更规范清晰。

逐级稀释时的混匀，由”振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀“改成”在振荡器上振荡混匀“，这个小小的改变，实现了由”手动“到”自动“的飞跃，这样混匀效果会更好，更能实现各实验室操作的统一，从而实现检验结果的一致性。

稀释度的选择由“2个~3个”变成了“1个~3个”，这样对于很有把握的样品，我们可以选择1个稀释度注皿哦，会大大提高工作效率。

培养基温度范围由46℃改成了46℃-50℃，温度范围更大，更容易操作。

增加了“如使用菌落总数测试片，应按照测试片所提供的相关技术规程操作”。